Préparation des lames pour l'analyse des frottis sanguins par IA

Shannon Mitchell Mis à jour par Shannon Mitchell

Prélèvement d’un échantillon de sang

  1. Sélectionnez la plus grande veine et l'aiguille appropriée pour le prélèvement sanguin.
  2. Utilisez la quantité minimale d'alcool et laissez sécher avant la ponction veineuse, car l'alcool peut provoquer une hémolyse de l'échantillon.
  3. Réduisez au minimum l'aspiration de la seringue et ne la retirez pas trop rapidement.

Stockage des échantillons de sang

  1. Une fois le sang prélevé sur le patient, il doit être transféré dans le tube de prélèvement EDTA.
  2. Retirez l'aiguille de la seringue et retirez le couvercle du tube de sang pour le transfert si vous n'utilisez pas un système BD Vacutainer®.
  3. Remplissez le tube jusqu'à la ligne de remplissage recommandée par le fabricant.

Étiquetage des lames

  1. Étiquetez les lames avec un crayon en notant l'ID du patient et la date.

Important : Les marqueurs et les stylos doivent être évités, car ils s'effaceront lors du processus de coloration.

Préparation de la lame

  1. Mélangez le sang anticoagulé à l’EDTA.
  2. Utilisez un tube capillaire à microhématocrite ou une pipette de précision pour prélever du sang du tube fraîchement mélangé, et placez délicatement une goutte sur la lame étiquetée. Il faut veiller à ne pas heurter le tube contre la glissière.

Important : Ne pas utiliser de pic en bois pour le transfert de sang, car les plaquettes et les globules blancs ont tendance à y adhérer.

Mise en place de la lame d’étalement

  1. Poser la lame d’étalement au-dessus de la lame étiquetée, devant la goutte de sang, et la tenir selon un angle de 30° à 45°.

Étalement du sang

  1. Faites glisser la lame d’étalement en arrière jusqu’à ce qu'elle touche la goutte de sang.
  2. Par capillarité, l'échantillon sera entraîné vers les bords de la lame.

Important : Ne pas laisser le sang atteindre les bords de la lame.

Achèvement de l’étalement

  1. Avant que le sang n'atteigne les bords de la lame, éloignez la lame d'écartement de la goutte de sang de l'échantillon en la poussant sur la lame inférieure d'un mouvement souple, stable et fluide. Conserver le même angle pendant tout le mouvement, et ne pas appliquer de pression verticale. Cette action doit produire un film de sang uniforme couvrant entre la moitié et les deux tiers de la lame. 
  2. Laissez la lame sécher à l'air pour éviter les artefacts de séchage à l'air.
    Important : Ne pas fixer la lame à chaud.
  3. Une fois le frottis sanguin réalisé, inspectez visuellement la lame. Le frottis doit ressembler à une empreinte de pouce et faire apparaître un bord en forme de plume à son extrémité.

Colorer la lame

  1. En utilisant une coloration de type Romanowsky (par exemple, Diff-Quik™), suivez de près les instructions du fabricant pour la mise en œuvre :
    1. Fixatif
    2. Coloration rouge
    3. Coloration bleue
    4. Rinçage à l'eau
    5. Séchage à l'air libre.

Remplacez régulièrement les colorations selon les recommandations du fabricant, et remplacez toute coloration souillée.

Mise en place de la lamelle 

  1. Une fois la lame colorée et séchée à l'air, placez une goutte d'huile d'immersion sur le frottis.
  2. Ensuite, placez une lamelle de 24 x 60 mm sur la lame.
  3. L'huile d'immersion permettra à la lamelle d’adhérer à la lame.
  4. La lame est maintenant prête à être analysée par Vetscan Imagyst.

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Analyse d'un test de frottis sanguin par IA

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