Preparação de lâminas para Análise de IA Esfregaço Sanguíneo

Shannon Mitchell Atualizado por Shannon Mitchell

Recolher uma amostra de sangue

  1. Selecionar a veia maior e a agulha adequada para a colheita de sangue.
  2. Utilizar a quantidade mínima de álcool e deixar secar antes da punção venosa, uma vez que o álcool pode causar hemólise da amostra.
  3. Minimizar a sucção na seringa e não a retirar demasiado depressa.

Armazenamento de amostras de sangue

  1. Após a colheita de sangue do paciente, este deve ser transferido para o tubo de colheita de amostras com EDTA.
  2. Retire a agulha da seringa e retire a tampa do tubo de sangue para transferência se não estiver a utilizar um sistema BD Vacutainer®.
  3. Encher o tubo até à linha de enchimento recomendada pelo fabricante.

Etiquetar lâminas

  1. Identifique as lâminas com a Identificação do paciente e a data usando um lápis.

Importante: Os marcadores de tinta e as canetas devem ser evitados, uma vez que a tinta sai durante o processo de coloração.

Preparar a lâmina

  1. Misture o sangue anticoagulado com EDTA.
  2. Use um tubo capilar de micro-hematócrito ou uma pipeta de precisão para extrair sangue do tubo acabado de misturar e, com cuidado, coloque uma gota na lâmina etiquetada. Deve ter cuidado para não bater com o tubo na lâmina.

Importante: Não deve ser usada uma vareta de madeira para esta transferência de sangue – as plaquetas e os leucócitos tendem a aderir à vareta.

Colocar a lâmina de espalhamento

  1. Coloque a lâmina de espalhamento sobre a lâmina etiquetada diante da gota de sangue e segure-a num ângulo de 30° a 45°.

Espalhar o sangue

  1. Deslize a lâmina de espalhamento para trás até fazer contacto com a gota de sangue.
  2. A ação capilar irá puxar a amostra para as margens da lâmina.

Importante: Não deixe que o sangue chegue às margens da lâmina.

Concluir o espalhamento

  1. Antes de o sangue chegar às margens da lâmina, com um movimento suave, estável e fluido, afaste a lâmina de espalhamento da amostra de sangue ao longo da lâmina de baixo. Mantenha o mesmo ângulo durante todo o movimento e não aplique pressão para baixo. O processo deve produzir uma película uniforme de sangue, abrangendo cerca de 1/2 a 2/3 da lâmina. 
  2. Deixar a lâmina secar ao ar para evitar artefactos de secagem ao ar.
    Importante: Não fixar a lâmina com calor.
  3. Após a realização do esfregaço sanguíneo, inspecionar visualmente a lâmina. O esfregaço deve ter a aparência de uma impressão digital do polegar e apresentar um bordo manchado visível na extremidade.

Corar a lâmina

  1. Utilizando uma coloração do tipo Romanowsky (por exemplo, Diff-Quik™), seguir rigorosamente as instruções do fabricante relativas ao processamento:
    1. Fixador
    2. Mancha vermelha
    3. Mancha azul
    4. Enxaguamento com água
    5. Secagem ao ar.

Substitua regularmente o corante de acordo com as recomendações do fabricante ou quando o corante estiver comprometido.

Coloque a lamela 

  1. Depois de a lâmina ter sido corada e seca ao ar, colocar uma gota de óleo de imersão no esfregaço.
  2. Em seguida, colocar uma lamela de 24 x 60 mm sobre a lâmina.
  3. O óleo de imersão permitirá que a lamela adira à lâmina.
  4. A lâmina está agora pronta para ser digitalizada pelo Vetscan Imagyst.

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