Preparación de portaobjetos para análisis de frotis sanguíneo mediante IA

Shannon Mitchell Actualizado por Shannon Mitchell

Extraer muestra de sangre

  1. Seleccione la vena más grande y la aguja adecuada para la extracción de sangre.
  2. Use la mínima cantidad de alcohol posible y deje secar antes de la punción venosa, ya que el alcohol puede causar hemólisis de la muestra.
  3. Minimice la aspiración de la jeringuilla, y no la extraiga demasiado rápido.

Almacenamiento de muestras de sangre

  1. Después de extraer sangre del paciente, debe transferirse al tubo de recogida de muestras con EDTA.
  2. Retire la aguja de la jeringuilla y quite el tapón del tubo de sangre para transferirla si no utiliza un sistema BD Vacutainer®.
  3. Llene el tubo hasta la línea de llenado recomendada por el fabricante.

Rotular portaobjetos

  1. Rotule los portaobjetos con el ID del paciente y la fecha con un lápiz.

Important: Se deben evitar los rotuladores y bolígrafos, ya que la tinta se correrá durante el proceso de tinción.

Preparar el portaobjetos

  1. Mueva la sangre anticoagulada con EDTA
  2. Utilice un tubo capilar para microhematocrito o una pipeta de precisión para extraer sangre del tubo que acaba de mover, e instile suavemente una gota en el portaobjetos rotulado. Hay que vigilar que el tubo no toque el portaobjetos.

Important: No deben utilizarse palillos de madera para la transferencia de sangre, pues las plaquetas y los glóbulos blancos tienden a adherirse a los palillos.

Colocar el portaobjetos de extensión

  1. Sitúe el portaobjetos de extensión sobre el portaobjetos rotulado frente a la gotita de sangre y manténgalo en un ángulo de 30° a 45°.

Extender la sangre

  1. Deslice el portaobjetos de extensión hacia atrás hasta que haga contacto con la gotita de sangre.
  2. La capilaridad atraerá la muestra hacia los bordes del portaobjetos.

Important: No permita que la sangre llegue a los bordes del portaobjetos.

Finalizar la extensión

  1. Antes de que la sangre llegue a los bordes del portaobjetos, con un movimiento suave, estable y fluido, empuje el portaobjetos de extensión alejándolo de la gota de sangre de la muestra a lo largo del portaobjetos inferior. Mantenga el mismo ángulo durante todo el movimiento y no aplique presión hacia abajo. De esta forma se debería generar una película uniforme de sangre que cubra aproximadamente de ½ a ⅔ del portaobjetos. 
  2. Deje que el portaobjetos se seque al aire para evitar artefactos de secado al aire.
    Important: No fije la preparación aplicando calor al portaobjetos.
  3. Después de realizar el frotis de sangre, inspeccione visualmente el portaobjetos. El frotis debe parecerse a una huella dactilar con un borde deshilachado en el extremo.

Teñir el portaobjetos

  1. Usando una tinción de tipo Romanowsky (p. ej., Diff-Quik™), siga cuidadosamente las instrucciones del fabricante para el procesamiento:
    1. Fijador
    2. Colorante rojo
    3. Colorante azul
    4. Enjuague con agua
    5. Secado al aire

Reemplace el colorante cada cierto tiempo de acuerdo con las recomendaciones del fabricante o cuando el colorante se haya estropeado.

Colocar el cubreobjetos 

  1. Después de que el portaobjetos se haya manchado y secado al aire, coloque una gota de aceite de inmersión en el frotis.
  2. Luego, coloque un cubreobjetos de 24 × 60 mm sobre el portaobjetos.
  3. El aceite de inmersión permitirá que el cubreobjetos se adhiera al portaobjetos.
  4. El portaobjetos ya está listo para ser escaneado por Vetscan Imagyst.

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